Konstruksi dan Ekspresi ProteinChimeric L1L2 HPV 52 pada Escherichia coli BL21 (DE3)
| Main Authors: | MUH. CHAERIL I, Prof. dr. Tri Wibawa, Ph.D, Sp.MK(K)., Dr. Apon Zaenal Mustopa M.Si. |
|---|---|
| Format: | Thesis |
| Terbitan: |
MAGISTER BIOTEKNOLOGI Universitas Gadjah Mada
, 2022
|
| Subjects: | |
| Online Access: |
http://etd.repository.ugm.ac.id/penelitian/detail/210243 |
Daftar Isi:
- Kanker serviks merupakan salah satu penyakit kanker dengan kasus paling banyak di dunia. Pada tahun 2020 angka kasus baru kanker serviks di Indonesia yaitu sebesar 36.633 kasus dengan angka kasus kematian sebesar 21.003 kasus. Human Papilloma Virus (HPV) merupakan penyebab paling umum dalam kasus kanker serviks yang terjadi pada wanita di seluruh dunia. Jenis HPV yang menyebabkan kanker serviks adalah jenis HPV high risk. Tipe HPV high risk yang banyak beredar di Indonesia adalah tipe 16, 18 dan 52. Pencegahan inveksi HPV dilakukan dengan pemberian vaksin. Bahan baku utama vaksin yang digunakan saat ini adalah protein rekombinan L1 HPV, akan tetapi vaksin yang ada saat ini belum mampu menginduksi antibodi netralisasi silang sehingga kemampuan untuk mencegah infeksi HPV tipe lainnya sangat terbatas. Oleh karena itu dibutuhkan bahan baku vaksin berupa protein rekombinan yang mampu mengatasi permasalahan tersebut. Penelitian ini dilakukan untuk mendapatkan protein rekombinan L1L2 sebagai bahan baku vaksin HPV yang mampu meningkatkan induksi antibodi netralisasi silang. Protein kapsid minor L2 pada HPV diketahui memiliki epitop yang mampu menginduksi terbentuknya antibodi netralisasi silang. Penelitian ini menggunakan pendekatan rekayasa genetika, dengan melakukan mutasi subtitusi sebanyak 39 basa pada bagian H4 helix L1 HPV 52 dengan epitop L2 sehingga dihasilkan gen chimeric L1L2 HPV 52. Mutasi dilakukan dengan metode overlap extension PCR, gen chimeric L1L2 HPV 52 hasil mutasi selanjutnya dikonstruksi kedalam vektor ekspresi pETSUMO untuk diekspresikan pada Escherichia coli BL21 (DE3). Hasil analisis sekuensing gen chimeric L1L2 HPV 52 menunjukkan bahwa bagian H4 helix pada L1 HPV 52 telah tersubtitusi dengan epitop L2 HPV 52. Gen chimeric L1L2 HPV 52 berhasil dikonstruksi ke dalam vektor ekspresi pETSUMO dan berhasil di ekspresikan pada Escherichia coli BL21 (DE3). Hasil analisis SDS-Page dan western blot menunjukkan terdapat pita pada ukuran 68 kDa. Penelitian ini diharapkan dapat menjadi dasar untuk mengembangkan vaksin HPV yang memiliki kemampuan menginduksi antibodi netralisasi silang terhadap berbagai macam jenis HPV.