Isolasi, Optimasi Amplifikasi, dan Kloning Gen phoQ Pada Salmonella typhi
Daftar Isi:
- Salmonella typhi adalah bakteri penyebab demam tifoid. Masalah utama dari terapi demam tifoid adalah adanya resistensi obat. PhoP-PhoQ two component system adalah regulator berbagai faktor virulensi dari Salmonella typhi yang dapat digunakan sebagai target untuk antibiotik baru. Tujuan utama dari penelitian ini adalah melakukan isolasi DNA, optimasi amplifikasi dan kloning dari gen phoQ yang akan digunakan untuk sistem screening antibiotik baru dalam terapi demam tifoid. DNA S.typhi diisolasi menggunakan Wizard Isolation Kit dan dilakukan PCR untuk mengamplifikasi gen phoQ menggunakan primer PhoQFWD dan PhoQREV, kemudian dilakukan kloning menggunakan vektor pGEM-T easy. Hasil kloning dikultur pada medium LB agar yang mengandung ampicillin, IPTG dan X-gal, dan dianalisis menggunakan metode lisis cepat. Isolasi DNA digunakan untuk mendapatkan kromosom Salmonella typhi. PCR dilakukan dengan jumlah siklus 30 siklus, tahap denaturasi 94oC selama 1 menit, tahap annealing 53oC selama 1 menit, tahap ekstensi 72oC selama 2 menit, dan kemudian hasilnya memperlihatkan pita diantara 1000 dan 1500 pb, mendekati ukuran yang diharapkan yaitu 1464 pb. Hasil kloning adalah 37 koloni putih dan 11 koloni biru. Setelah dilisis cepat, diperkirakan koloni 9, 18, 24 dan 34 mengandung DNA sisipan.