PemurnianParsialSelulaseBacillus circulansMenggunakanMetodeFraksinasiAmoniumSulfatFraksi0-10 %, 10-40%, 40-60 % 60-100 % danKarakterisasiKinetikanya
| Main Author: | Kurnia Ayu Syafitri; MAHASISWA |
|---|---|
| Format: | PeerReviewed eJournal |
| Bahasa: | ind |
| Terbitan: |
SKRIPSI Jurusan Kimia - Fakultas MIPA UM
, 2015
|
| Online Access: |
http://karya-ilmiah.um.ac.id/index.php/kimia/article/view/46223 |
Daftar Isi:
- ABSTRAK Syafitri, Kurnia Ayu. 2015. Pemurnian Parsial Selulase Bacillus circulans Menggunakan Metode Fraksinasi Amonium Sulfat Fraksi 0-10 %, 10-40 %, 40-60 % 60-100 % dan Karakterisasi Kinetikanya. Skripsi, Jurusan Kimia, FMIPA, Universitas Negeri Malang. Pembimbing: (1) Evi Susanti, S. Si., M. Si., (II) Dr. Suharti , S.Si., M. Si. Kata Kunci: pemurnian parsial, selulase, pengendapan, kinetika enzim. Penggunaan ekstrak kasar selulase pada dunia industri kurang diminati karena aktivitas dan stabilitasnya rendah. Oleh karena itu, perlu dilakukan pemurnian untuk meningkatkan aktivitas dan stabilitas selulase. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui (1) aktivitas spesifik, tingkat kemurnian, dan yield protein selulase Bacillus circulans yang dimurnikan dari ekstrak kasarnya secara parsial menggunakan metode fraksinasi amonium sulfat pada tingkat kejenuhan 0-10 %, 10-40 %, 40-60 %, 60-100 % dan (2) karakterisasi kinetikanya meliputi penentuan Km dan Vmak selulase Bacillus circulans yang memiliki aktivitas spesifik tertinggi pada substrat kertas saring. Penelitian ini bersifat eksploratif dan terdiri dari beberapa tahap yaitu (1) produksi ekstrak kasar selulase Bacillus circulans, (2) penentuan aktivitas spesifik ekstrak kasar selulase Bacillus circulans, (3) pemurnian selulase Bacillus circulans menggunakan metode fraksinasi amonium sulfat, (4) penentuan aktivitas spesifik, tingkat kemurnian, dan yield protein hasil pemurnian pada tingkat kejenuhan 0-10 %, 10-40 %, 40-60 %, 60-100 % dan (5) penentuan kinetikanya meliputi penentuan Km dan Vmak selulase Bacillus circulans yang memiliki aktivitas spesifik tertinggi, aktivitas CMCase, avicelase, β-glukosidase dan selulase total diukur berdasarkan gula pereduksi yang dihasilkan. Kadar gula pereduksi ditentukan dengan metode Somogyi-Nelson. Kadar protein ditentukan dengan metode Lowry. Tingkat kemurnian merupakan perbandingan antara aktivitas spesifik enzim setelah dimurnikan dengan aktivitas spesifik enzim sebelum dimurnikan. Yield protein merupakan perbandingan antara aktivitas total enzim setelah dimurnikan dengan aktivitas total ekstrak kasar dikali 100 %. Hasil penelitian menunjukkan bahwa, fraksi II (10-40 %) selulase Bacillus circulans memiliki aktivitas spesifik, tingkat kemurnian, dan yield protein tertinggi berturut-turut sebesar 4288 U/mg, 1,63 kali, dan 8,55 % untuk aktivitas CMCase; 4142,6 U/mg, 2,02 kali, dan 10,6 % untuk aktivitas avicelase; 5750,5 U/mg, 2,06 kali, dan 10,8 % untuk aktivitas β-glukosidase dan 2145,21 U/mg, 2,44 kali, dan 12,85 % untuk aktivitas selulase total. Besarnya nilai Km dan Vmak selulase Bacillus circulans fraksi II pada substrat kertas saring berturut-turut adalah 52 mg dan 325 U/mL ABSTRACT Syafitri, Kurnia Ayu. 2015. Partial Purification of Crude Extract cellulase Bacillus circulans Using Ammonium Sulfate Fractionation Method In Fraction 0-10 %, 10-40 %, 40-60 %, 60-100 % and Characterization it’s Kinetics. Undergraduate, Departement of Chemistry, Mathematics and Science Faculty, State Universty of Malang. Advisors: (1) Evi Susanti, S.Si., M. Si., (II) Dr. Suharti , S.Si., M. Si. Keyword: Partial purification, cellulase, fractination, kinetics of enzyme The use of crude extract cellulase in the industrial is less desirable because of its low activity and stability. Therefore, purification is necessary to increase the activity and stability of cellulase. The purpose of this study is to determine (1) the specific activity, purity, and yield protein of crude extract Bacillus circulans cellulase which partially purified using ammonium sulfate fractionation method at saturation of 0-10 %, 10-40 %, 40-60 %, 60-100 %, and (2) the kinetic parameter of the enzyme, Km and Vmak Bacillus circulans cellulase with a filter paper as a substrate. This study is an explorative study that consists of several stages: (1) production of crude extract Bacillus circulans cellulase, (2) determination the specific activity of crude extract Bacillus circulans cellulase, (3) purification Bacillus circulans cellulase from its crude extract using fractination ammonium sulfate method, (4) determination the specific activity, purity, and yield of cellulase fractions at ammonium sulfate saturation of 0-10 %, 10-40 %, 40-60 %, 60-100 % and (5) determination Km and Vmak cellulase Bacillus circulans. CMCase, avicelase, β-glucosidase and total cellulose activity was measured based on the concentration of produced reducing sugar which are determined by the Somogyi-Nelson method. Protein level was determined by Lowry method. The degree of purity is the ratio between the specific activity of the enzyme after purified with a specific activity of the enzyme before purified. Yield of cellulase is the ratio between the total activity of the enzyme after purified with a total activity of crude extract and multiplied by 100%. The results showed that, the fraction II (10-40 % saturation) has a high specific activity, purity, and yield protein, which are 4288 U/mg; 1,63 times and 8,55 % for CMCase activity, respectively; 4142,6 U/mg; 2,02 times and10,6 % for avicelase activities; 5750,5 U/mg; 2,06 times and 10,8 % for the β-glucosidase activity, respectively; and 2145,21 U/mg; 2,44 times and 12,85 % for total cellulase activity respectively. Value of Km and Vmak of the purified Bacillus circulans using filter paper substrate are 52 mg and 325 U/mL.