IDENTIFIKASI RESIDU-RESIDU KATALITIK α-L-ARABINOFURANOSIDASE Dictyoglomus thermophilum H-6-12 DENGAN METODE SITED DIRECTED MUTAGENESIS
| Main Author: | NESIA RAHMANDANI IMASELFI, 081511533084 |
|---|---|
| Format: | Thesis NonPeerReviewed Book |
| Bahasa: | eng |
| Terbitan: |
, 2019
|
| Subjects: | |
| Online Access: |
http://repository.unair.ac.id/89547/1/MPK.%2089-19%20Ima%20i%20abstrak.pdf http://repository.unair.ac.id/89547/2/MPK.%2089-19%20Ima%20i%20daftar%20isi.pdf http://repository.unair.ac.id/89547/3/MPK.%2089-19%20Ima%20i%20daftar%20pustaka.pdf http://repository.unair.ac.id/89547/4/MPK.%2089-19%20Ima%20i.pdf http://repository.unair.ac.id/89547/ http://lib.unair.ac.id |
Daftar Isi:
- Enzim α-L-arabinofuranosidase yang berasal dari bakteri termofil Dictyoglomus thermophillum (Dt-Ara1) merupakan enzim xilanolitik. Dt-Ara1 dikelompokkan dalam famili GH51 dimana terdapat 2 asam amino glutamat yang berperan sebagai residu katalitik. Berdasarkan multiple sequence alligment dengan enzim α-L-arabinofuranosidase famili GH51 lainnya, diduga asam amino glutamat173 dan glutamat 301 adalah residu katalitik Dt-ara1. Pada penelitian ini, asam amino yang diduga sebagai residu katalitik dimutasi menjadi asam amino alanin dan dieskpresikan ke dalam sistem ekspresi E. coli BL21-pET-15b. Dt-Ara1 mutan dimurnikan dengan kromatografi afinitas menggunakan kolom HisTrap. Analisa SDS-PAGE menunjukkan hasil yang didapat belum murni sehingga dilanjutkan pemurnian dengan kromatografi penukar anion. Hasil SDS-PAGE menunjukkan didapatkan protein yang lebih murni dari pemurnian sebelumnya. Untuk mengkonfirmasi apabila asam amino glutamat 173 dan glutamat 301 adalah residu katalitik Dt-ara1, dilakukan perbandingan hasil uji aktivitas. Pada Dt-Ara1 mutan Glu-173-Ala menunjukkan terjadi penurunan aktivitas signifikan dibandingkan dengan jenis rekombinan, yaitu dari 24832 U/mg-1 Menjadi 695,6 U/mg-1 , sedangkan Dt-Ara1 mutan Glu-301-Ala tidak ada aktivitas. Hal ini menunjukkan bahwa asam amino glutamat173 dan glutamat301 adalah residu katalitik enzim Dt-Ara1