OPTIMALISASI AMPLIFIKASI PCR UNTUK ISOLASI GEN FUSI cbm-lcc2 DARI pET30a REKOMBINAN
| Main Author: | AISYAH PRATIWI ARIMURTI, 081511533059 |
|---|---|
| Format: | Thesis NonPeerReviewed Book |
| Bahasa: | eng |
| Terbitan: |
, 2019
|
| Subjects: | |
| Online Access: |
http://repository.unair.ac.id/89542/1/MPK.%2087-19%20Ari%20o%20abstrak.pdf http://repository.unair.ac.id/89542/2/MPK.%2087-19%20Ari%20o%20daftar%20isi.pdf http://repository.unair.ac.id/89542/3/MPK.%2087-19%20Ari%20o%20daftar%20pustaka.pdf http://repository.unair.ac.id/89542/4/MPK.%2087-19%20Ari%20o.pdf http://repository.unair.ac.id/89542/ http://lib.unair.ac.id |
Daftar Isi:
- Lakase merupakan enzim yang mengkatalis degradasi lignin dengan cara oksidasi. Carbohydrate Binding Module (CBM) merupakan komponen penting dalam sisi aktif enzim yang dapat meningkatkan aktivitas enzim. Gen cbm-lcc2 telah terinsersi pada plasmid pET30a dan diekspresikan Escherichia coli BL21. Namun, masih diperlukan optimalisasi untuk ekspresinya. Penelitian ini bertujuan untuk mengoptimalisasi isolasi dan amplifikasi gen cbm-lcc2 dari pET30a dalam Escherichia coli TOP10 sebagai langkah awal proses subkloning. DNA template yang digunakan pada penelitian ini adalah pET30a-cbm-lcc2. Metode isolasi meliputi metode Polymerase Chain Reaction (PCR), pemurnian dan sekuensing. Proses PCR dilakukan menggunakan enzim Taq Polimerase dan Pfu Polimerase. PCR dilakukan sebanyak 30-35 siklus pada kondisi denaturasi 95oC, annealing 53-63oC dan extension 72oC. Amplikon PCR dianalasis dengan metode sekuensing untuk mengetahui bahwa gen cbm-lcc2 yang akan diklon ke dalam pET32a telah terisolasi dan memiliki tingkat homologi 99% gen cbm-lcc2 dari pET30a.