Perbandingan Metode SYBR Green dan Hydrolysis Probe dalam Analisis DNA Gelatin Sapi dan Gelatin Babi Menggunakan Real Time Polymerase Chain Reaction
| Main Authors: | Zilhadia, Zilhadia, Izzah, Afifah Nurul, Betha, Ofa Suzanti |
|---|---|
| Other Authors: | Departemen Farmasi FKIK UIN Syarif Hidayatullah Jakarta |
| Format: | Article info application/pdf eJournal |
| Bahasa: | ind |
| Terbitan: |
Fakultas Farmasi Universitas Andalas
, 2017
|
| Subjects: | |
| Online Access: |
http://jsfk.ffarmasi.unand.ac.id/index.php/jsfk/article/view/194 http://jsfk.ffarmasi.unand.ac.id/index.php/jsfk/article/view/194/112 |
Daftar Isi:
- Pemanfaatan gelatin secara luas menimbulkan kontroversi dan kekhawatiran bagi masyarakat muslim karena pada umumnya gelatin terbuat dari kulit babi dan sapi. Salah satu teknik analisis yang dapat membedakan gelatin sapi dan gelatin babi adalah Real Time Polymerase Chain Reaction (PCR). Real Time PCR merupakan metode analisis berbasis DNA yang handal, efektif, dan terpecaya. Dalam analisis kualitatif dan kuantitatif, Real Time PCR membutuhkan pewarna fluoresens. Pewarna fluoresens yang umum digunakan adalah SYBR green dan hydrolysis probe. Telah dilakukan perbandingan antara metode SYBR green dan hydrolysis probe dalam analisis DNA gelatin menggunakan Real Time PCR. DNA pada gelatin diisolasi menggunakan kit komersial. Isolat DNA gelatin sapi dan DNA gelatin babi didapatkan sebanyak 19,38 ng/μl dan 13,63 ng/μl dengan kemurnian 1,566 dan 1,573. Isolat DNA yang dianalisis dengan metode SYBR green menggunakan suhu annealing 65o C untuk primer sapi dan suhu annealing 60o C untuk primer babi. Isolat DNA yang dianalisis dengan metode hydrolysis probe menggunakan suhu annealing 60o C untuk primer babi dan primer sapi. Hasil analisis dari kedua metode menunjukkan bahwa metode hydrolysis probe lebih spesifik dalam mengidentifikasi DNA pada gelatin dibandingkan menggunakan metode SYBR green.
- Gelatin has a large application in the food, pharmaceutical and cosmetics industries. Gelatin is mostly derived from the skin or bone of porcine and bovine. Porcine gelatin is forbidden for Muslim and Jews. For this reason, analytical methods to detect gelatin are needed to make sure the source of gelatin. One of the analytical techniques that can differentiate bovine and porcine gelatin is Real Time Polymerase Chain Reaction (PCR). There are two popular methods of fluorescence dye, namely SYBR green and hydrolysis probe. This study was conducted to compare SYBR green and hydrolysis probe method in analyzing porcine and bovine gelatin DNA using Real Time PCR. The DNA was isolated by commercial kit. The obtained porcine and bovine gelatin DNA were 19.38 ng/μl and 13.63 ng/μl with purity were 1,566 and 1,573, respectively. Then, isolated DNA was analyzed by SYBR green and hydrolysis methods. SYBR green methods was done by annealing temperature of 65 oC for bovine primer and 60 oC for porcine primer. Therefore, hydrolysis probe methods were analyzed by annealing temperature of 60 oC for both porcine primer and bovine primer. The result showed that the hydrolysis probe was higher specificity to identify of porcine and bovine gelatin DNA than SYBR green method.