Transformasi Pichia pastoris dengan gen fusi CalB-cbm dan ekspresi protein CALB (Candida antartica Lipase B) rekombinan / Heny Rizkiatul Hasanah
| Main Author: | Hasanah, Heny Rizkiatul |
|---|---|
| Format: | Thesis NonPeerReviewed |
| Terbitan: |
, 2020
|
| Online Access: |
http://repository.um.ac.id/94402/ |
Daftar Isi:
- RINGKASANHasanahHenyRizkiatul.2019.TransformasiPichiapastorisdenganGenFusiCalB-cbmdanEkspresiProteinCALB(CandidaantarcticaLipaseB)Rekombinan.SkripsiJurusanKimiaFMIPAUniversitasNegeriMalang.Pembimbing(1)Dr.SuhartiS.PdM.Si1(2)Dr.AsrulMuhamadFuadM.Si2KataKunciCalB-cbmpGAPPichiapastorisTransformasiEkspresiEnzimlipase(EC3.1.1.3)merupakanenzimyangmemilikiperanpentingdalambioteknologimodern.GenpengkodeenzimlipasetelahberhasildikonstruksidalamgenfusiCALB-CBMdenganverktorekspresiPGAPdanditransformasikankedalamselE.coli.GenfusitersebutakandikembangkandalamskalayanglebihbesardengancaramentransformasikangenfusiCALB-CBMmenggunakanvektorekspresiPGAPkedalamPichiapastorissehinggadiperolehproteinrekombinanyangdapatdipelajariekspresinya.MetodeyangdigunakanuntukintegrasiyangstabildarivektorekspresikegenomPichiapastorisadalahrekombinasihomologus.Secaragarisbesarpenelitianiniterdiridarilimatahap.PertamagenfusidisiapkanterlebihdahuludengancaradiisolasidariE.colidenganmetodealkalynelysisdipurifikasidenganmetodeekstraksimengginakanCholoroformIsoamylalcohol(CI)denganperbandingan11(v/v)dikarakterisasidenganmetodePCRdipotongdenganenzimrestriksidandikuantifikasimenggunakanNanophotometer.KeduaselkompetenPichiapastorisdisiapkandenganmetodemodifikasiyangmenggunakanlarutanDithiotreitol(DTT)dangenfusidiintegrasikankedalamgenomPichiapastorismenggunakanmetodeelectroporasi.Ketigaseltransformandiseleksidenganmediayangmengandungzeocin.Keempatseltransformandipelajariekspresinyamenggunakanmetodegelelektroforesis.KelimaseltransformandiujiaktifitasnyamenggunakanplateassayyangmengandungRhodaminBdanTween80.HasildaripenelitianiniadalahkeberadaanGenCalB-cbmdalamvektorekspresipGAPtelahberhasildiisolasidandiintegrasikankedalamgenomPichiapastorisSMD1168H.ProteinCALB-CBMtelahberhasildiekspresiekstraselulerdandiamatidenganSDS-PAGEyangmenunjukkanadanyapitapadaposisidiantarapenanda45-662kDa.SecarakualitatifseltransformanPichiapastorisdapatmensekresikanenzimlipasedanmenunjukkanaktifitasnyadalammendegradasiikatanesterdalamTween80menjadiasamlemakyangditunjukkanolehpendaranwarnadariRhodaminB.1ProgamStudiS1KimiaUniversitasNegeriMalangIndonesia2PusatPenelitianBioteknologiLembagaIlmuPengetahuanIndonesiaIndonesiaRINGKASANHasanahHenyRizkiatul.2019.TransformasiPichiapastorisdenganGenFusiCalB-cbmdanEkspresiProteinCALB(CandidaantarcticaLipaseB)Rekombinan.SkripsiJurusanKimiaFMIPAUniversitasNegeriMalang.Pembimbing(1)Dr.SuhartiS.PdM.Si1(2)Dr.AsrulMuhamadFuadM.Si2KataKunciCalB-cbmpGAPPichiapastorisTransformasiEkspresiEnzimlipase(EC3.1.1.3)merupakanenzimyangmemilikiperanpentingdalambioteknologimodern.GenpengkodeenzimlipasetelahberhasildikonstruksidalamgenfusiCALB-CBMdenganverktorekspresiPGAPdanditransformasikankedalamselE.coli.GenfusitersebutakandikembangkandalamskalayanglebihbesardengancaramentransformasikangenfusiCALB-CBMmenggunakanvektorekspresiPGAPkedalamPichiapastorissehinggadiperolehproteinrekombinanyangdapatdipelajariekspresinya.MetodeyangdigunakanuntukintegrasiyangstabildarivektorekspresikegenomPichiapastorisadalahrekombinasihomologus.Secaragarisbesarpenelitianiniterdiridarilimatahap.PertamagenfusidisiapkanterlebihdahuludengancaradiisolasidariE.colidenganmetodealkalynelysisdipurifikasidenganmetodeekstraksimengginakanCholoroformIsoamylalcohol(CI)denganperbandingan11(v/v)dikarakterisasidenganmetodePCRdipotongdenganenzimrestriksidandikuantifikasimenggunakanNanophotometer.KeduaselkompetenPichiapastorisdisiapkandenganmetodemodifikasiyangmenggunakanlarutanDithiotreitol(DTT)dangenfusidiintegrasikankedalamgenomPichiapastorismenggunakanmetodeelectroporasi.Ketigaseltransformandiseleksidenganmediayangmengandungzeocin.Keempatseltransformandipelajariekspresinyamenggunakanmetodegelelektroforesis.KelimaseltransformandiujiaktifitasnyamenggunakanplateassayyangmengandungRhodaminBdanTween80.HasildaripenelitianiniadalahkeberadaanGenCalB-cbmdalamvektorekspresipGAPtelahberhasildiisolasidandiintegrasikankedalamgenomPichiapastorisSMD1168H.ProteinCALB-CBMtelahberhasildiekspresiekstraselulerdandiamatidenganSDS-PAGEyangmenunjukkanadanyapitapadaposisidiantarapenanda45-662kDa.SecarakualitatifseltransformanPichiapastorisdapatmensekresikanenzimlipasedanmenunjukkanaktifitasnyadalammendegradasiikatanesterdalamTween80menjadiasamlemakyangditunjukkanolehpendaranwarnadariRhodaminB.1ProgamStudiS1KimiaUniversitasNegeriMalangIndonesia2PusatPenelitianBioteknologiLembagaIlmuPengetahuanIndonesiaIndonesia